常用的方法有:
1病原檢測(cè)
病原檢測(cè)主要指用病毒分離培養(yǎng)、電鏡形態(tài)觀察、病毒抗原檢測(cè)和基因測(cè)定等方法從宿主標(biāo)本中直接檢測(cè)病毒或病毒基因。由于前兩種方法難度大,且需要特殊設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員。因此僅抗原檢測(cè)和RT-PCR(反轉(zhuǎn)錄-PCR)可用于臨床診斷。
2 抗體檢測(cè)
血清中HIV抗體是判斷HIV感染的間接指標(biāo)。根據(jù)其主要的適用范圍,可將現(xiàn)有HIV抗體檢測(cè)方法分為篩檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。
3 確證試劑
篩檢實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性血清的確證最常用的是Western blot(WB),由于該法相對(duì)窗口期較長(zhǎng),靈敏度稍差,而且成本高昂,因此只適合作為確證實(shí)驗(yàn)。隨著第三代和第四代HIV診斷試劑靈敏度的提高,WB已越來(lái)越滿足不了對(duì)其作為確證實(shí)驗(yàn)的要求。
FDA批準(zhǔn)的另一類篩檢確證試劑是-免疫熒光-試驗(yàn)(IFA)。IFA比WB的成本低,而且操作也相對(duì)簡(jiǎn)單,整個(gè)過(guò)程在1-1.5小時(shí)內(nèi)即可結(jié)束。此法的主要缺點(diǎn)是需要昂貴的熒光檢測(cè)儀和有經(jīng)驗(yàn)的專業(yè)人員來(lái)觀察評(píng)判結(jié)果,而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果無(wú)法長(zhǎng)期保存?,F(xiàn)在FDA推薦在向WB不能確定的供血員發(fā)布最終結(jié)果時(shí)以IFA的陰性或陽(yáng)性為準(zhǔn),但不作為血液合格的標(biāo)準(zhǔn)。
4篩檢試驗(yàn)
篩檢試驗(yàn)主要用于對(duì)供血員進(jìn)行篩查,因此要求操作簡(jiǎn)便,成本低廉,而且靈敏、特異。目前世界上主要的篩檢方法仍然是ELISA,還有少數(shù)的顆粒凝集試劑和快速ELISA試劑。
ELISA有很高的靈敏度和特異性,操作簡(jiǎn)單,僅需要實(shí)驗(yàn)室配備酶標(biāo)儀和洗板機(jī)即可應(yīng)用,特別適合于試驗(yàn)室大規(guī)模篩檢使用。
顆粒凝集實(shí)驗(yàn)是另一種操作簡(jiǎn)單方便,成本低廉的檢測(cè)方法,該方法結(jié)果可通過(guò)肉眼判定,靈敏度很高,特別適合發(fā)展中國(guó)家或大量篩選供血員時(shí)使用,缺點(diǎn)是必須使用新鮮樣品,特異性較差。
80年代后期發(fā)展起來(lái)的斑點(diǎn)印跡檢測(cè)(Dot-blot assay)是一種快速ELISA(Rapid ELISA)方法,這種方法操作極為簡(jiǎn)便,過(guò)程短暫,整個(gè)過(guò)程多數(shù)在5-10分鐘內(nèi)甚至3分鐘內(nèi)即可結(jié)束,但該法比ELISA和顆粒凝集試劑昂貴得多。
金免疫測(cè)定是以膠體金為標(biāo)記物,以硝酸纖維素膜為載體的固相免疫測(cè)定,分為滲濾和層析兩種形式。用于HIV抗體檢體金試紙條屬于金免疫層析,且大多數(shù)為間接法及雙抗原夾心法,兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn),但都簡(jiǎn)單而快速,數(shù)分鐘即可得出結(jié)論,不需儀器設(shè)備,操作人員不需特殊訓(xùn)練,試劑穩(wěn)定,適用于單份測(cè)定等。